Día Veinte

El Jueves 13 de Noviembre seguimos haciendo al presentación en Power Point para el día del coloquio, que en nuestro caso será el Jueves veinte de Noviembre.
Terminamos de decidir el orden de la presentación y redactámos la mayor parte de las diapositivas que formarán parte de ella.
Nos reunirémos uan vez más para arreglar los detalles de la presentación.
Prónto subirémos las monografía completa de nuestro trabajo a lo largo de estos meses, dónde encontraran un análisis completo de los resultados obtenidos, las conclusiones y el modelo propuesto al que llegó el laboratorio en el que trabajámos.
Esperámos que hayan disfrutado nuestro Blog y proyecto, y que quedaran en claro cada una d las técnicas que realizámos y para qué las haciamos, támbien que hayan podido interiorizarse en el proyecto y entendido las conclusiones a las que hemos llegado.

¡¡Gracias por todo!!

Judith y Melina.

Día Diecinueve

El Jueves 6 de Noviembre nos dedicamos todo el día, junto con Silvina, a redactar y arreglar los últimos detalles de la monografía que ya debía ser entragada.
Buscamos lo que nos faltaba de la bibliografía y pusimos las conclusiones y el modelo propuesto en el trabajo.
Por último comenzamos con la presentación de Power Point para el día del coloquio.

¡Hasta el próximo Jueves!

Día Diecisiete

El Jueves 30 de Octubre seguimos con la redacción de la monografía. Realizámos la discución, corregimos algunos errores de los resultádos y del resumen y Abstract que habíamos hecho en nuestras casas. Todo esto junto a Silvina.
En la siguiente semana también seguiremoa con la monografía y ya no realizaremos nigún práctico en la pasantía.
¡Hasta el Jueves que viene!

Día Dieciseis

El Jueves 23 de Octubre terminamos la práctica que veniamos llevando a cabo desde el anterior Jueves. Es decir que seguimos contándo los espermatozoides pegados a las células oviductáles que había por campo de visión.
No llegamos a contar veinte campos de cada muestra, por lo que los reducimos a diez, aunque de esta manera tampoco llegamos con el tiempo.
Además comenzámos con la monografía que debemos entregar en la escuela acerca del proyecto que venímos haciendo durante todos estos meses. Hablámos y comenzámos a redactar todos los resultado de las distíntas prácticas realizadas a lo largo de estos meses, análizamos los gráficos y dicutímos la mejor manera de ordenar los resultádos en la monografía.

¡Hasta el próximo Jueves!

Día Quince

El Jueves 16 de Octubre trabajamos con lo co-cultivos; los culitivos de células ciliadas del endometrio de la vaca, a los cuales ya les habían puesto los ESP y ya habían sido lavados auqellos que no se aferraron a estas células por estar capacitados.

Hay que contar 20 campos por muetra (pool) con el cuenta ganado y anotarlos en una planilla para luego sacar el promedio de la cantidad que hay.

El problema que tubimos a lo largo de toda la observación es que costaba distinguir los ESP de las células epiteliales, había que mover mucho el micro para poder verlas y el fondo tenia casi el mísmo color que los ESP, fue muy dificultoso contarlas y había que forzar bastánte la vista. Pero finalmente logramos hacerlo bastante bien.

Durante este día pudímos terminar con una de las muestras y comenzar con otra, el próximo jueves también estaremos haciendo esto.

Esto se hace para ver si hay una cierta concentracion de AEA capaz de despegar a los ESP de las células ciliadas.

Dia Catorce

Hoy Jueves 2 de Octubre terminamos la inmunocitoquímica que largamos el anterior Jueves, lo siguiente es el protocolo que seguimos para realizarla:

Obtención de los ESP bovinos

Las pajuelas de ESP fueron descongeladas y lavadas por centrifugación para descaratar el medio en el que esatban criopresenvados. Luego el pellet fue resuspendido en 1ml y los ESP fueron contados en una camara de Newbauer para obtener la concentración ideal ara utilizar en preparados de inmunocitoquímica (50 a 100 mil ESP/Well), despues loe ESP fueron colocados en portaobjetos para realizar la inmunocitoquímica.


Inmunocitoquímica o Inmunoohistquímica

Los ESP fueron permeabilizados con metanol 100% a -20ºC durante 10 minutos, luego fueron lavados con PBS para sacar el exceso de metanol. Posteriormente las muestras fueron tratadas con una solución de bloqueo (para bloquear los sitios de unión inespecíficos del anticuerpo secundario) conteniendo PBS-BSA (40mg/ml) durante 1 hora a temperatura ambiente. Al cabo de ese tiempo se levantó la solución de bloqueo y se incubó con el primer anticuerpo según la siguiente tabla:

1ºAnticuerpo, origen, dilución y función (orden)

- TRPV1; Conejo; 1/20; Receptor endovalinoide con sitio de unión a la AEA endógeno.

- CB1; Conejo; 1/20; Receptor de endocanabinoides sitio de unión de AEA exógeno.

- CB1; Conejo; 1/20; Receptor de endocanabinoides sitio de unión de AEA exógeno.


los cuáles fueron incubaso toda la nochea 4ºC. Despues de esta incubación, los preparados fueron lavados tres veces con PBS TWEEN 20 0.1% durante 5 minutos (para evitar uniónes inespecíficas del primer anticuerpo, sacar las uniónes láviles).

Se incubó con un segundo anticuerpo (un anti IgG de conejo hecho en cabra, acoplado a una molécula de Rodamina; Alexa 555) en una concentración de 1 /250 en PBS durante 1 hora a temperatura ambiente. Luego se hicieron tres lavados con PBS TWEEN 20 0.1% y los ESP fueron montados en una solución de PBS Glicerol 1:9.

En el B y su contraste el A se puede ver la fluorecencia del segundo anticuerpo en sus colas (también la vimos en sus cuñas, el borde de las cabezas, pero en la foto no salió), y en las imágenes C y D se ve el control negativo, donde no hay fluorecencia.

También observamos, al microscopio, células ovioductales. Estas se encontraban en movimiento por el batido ciliar y con el tienpo se irán anclando en el medio y comenzarán a extenderse. Aquí es dónde sembraremos los ESP para ver como reaccionan ante la AEA (si se capacitan o no, o si se desprenden de las células ovioductales o no).

Día Trece

El Jueves 25 de Septiembre realizamos la primera parte de la inmunocitoquímica, es decir que preparamos las muestras con las que trabajaremos el próximo Jueves.

Lo primero que hicimos fue retirar de el nírtrogeno líquido las pajuelas que contienen los ESP de del toro llamado Hercules y los lavamos con PBS (10ml) y lo centrifugamos durante 5 minutos para quitarles el medio nutririvo en el que venían.

Luego contámos en la cámara de New Bauer la concentración de ESP por ml y después calculamos cuántos poner por muestra (la concentración que debíamos tomar). Decidímos colocar 100 mil por well, osea que tomamos 24 microlitros.

Esto fue lo que hicimos en este día.

Silvina se encargará de colocar el primer anticuerpo, para así comenzar con la inmunocitoquímica. Lo que hará es lo siguiente:

Los ESP serán permebilizados con metanol 100% a -20ºC durante 10 minutos, luego serán lavados con PBS para quitar el exceso de metanol. Posteriormente las muetras serán tratadas con una solución de Bloqueo, que bloquerá los sitios inespecíficos del anticuerpo secundario, que contiene PBS-BSA (40mg/ml) que se dejará durante 1 hora a temperatura ambiente, al cabo de ese tiempo se lavantará la solución y se incubará durante toda la noche a 4ºC con el primer anticuerpo según lo siguiente:

- Anticuerpo: TRPV1; Orígen: Conejo; Dilución: 1/20; Función: Receptor de endocanabinoides con sitio de unión a la AEA endógeno.

- Anticuerpo: CB1-FA1; Orígen: Conejo; Dilución: 1/20; Función: Receptor de endocanabinoides de unión de AEA exógeno.

- Anticuerpo: CB1-15; Orígen: Conejo; Dilución: 1/20; Función: Receptor de endocanabinoides de unión de AEA exógeno.

¡Hasta el próximo Jueves!

Día Doce

El Jueves 18 de Septiembre junto con Silvina, la investigadora, llevamos a cabo la inmunocitoquímica que habíamos preparado la última semana que tubimos la pasantía.

En este día pusimos el segundo anticuerpo (diluído 1/250), el cual es un anti IgG de conejo hecho en cabra acopldo a una molécula de Rodamina (esta expuesta a la longitud de onda de 555 fluorece rojo), y lo dejamos 1 hora a temperatura ambiente, luego realizamos tres lavados con PBS TWEEN 20 0.1%, se los montó en una solución de PBS Glicerol 1:9 y fuimos a mirarlo al microscopio.

La inmunocitoquímica no resultó exitosa, esto pudo ser por dos problemas:

1- La muestra preparada estubo un mes guardada hasta que hicimos la experiencia, con lo cual esta pudo ser afectada por la cantidad de tiempo que pasó entre su preparación y la realización de la experiencia.

2- Pudo haber sido el primer anticuerpo el causante del problema...

Por lo tanto la siguente semana realizaremos otra inmunocitoquímica.

¡Hasta la semana que viene!

Día Once

Terminamos de ajustar algunos detalles de la introducción junto con la investigadora.

Además, realizamos un PSA-FITC, con la ya comentada técnica. De esta muestra sacamos las fotos que aquí se ven, las cuales muestran como nosotras vemos a los ESP en el microscopio.

Introducción

Esta es la introducción de nuestro proyecto, disfrutenla!

http://www.scribd.com/doc/6403378/INTRODUCCION-Meli-y-Judi-Final

Dia diez

El día 25 de julio, terminamos la introducción de la monografía sobre la investigación junto con la Dr. Silvina Pérez Martínez.
No realizamos ninguna práctica.
Hasta la próxima.
Melina y Judith.

Día Nueve

Hoy 10 de Julio realizamos una capacitación de ESP a travéz del tratamiento de CTC.

Primero preparamos junto con Silvina el diluyente (4 ml), para esto se midieron 4 ml de agua destilada y se pesaron 30 mg de NaCl, 2.4 mg de Cisteína, 1 mg de CTC y se agregaron 80 microlitros de TRIS-HCl 1M (ph= 7.9).

Luego descongelamos tres pajuelas de Lost y volcamos el contenido en un tubo Falcon y lo pasamos por las columnas con lana de vidrio, previamente preparadas. Realizamos todo el procedimiento ya contado en días anteriores.

Hicimos cuatro preparados:

- Heparina

- Heparina + CB1

- Heperina + CZP

- Control

Se sabe que la heparina es un agente capacitante en bovinos.

CB1 es un antagonista de los receptores de anandamida, al igual que la CZP.

Este experimento lo realizamos para ver si la heparina y la anandamida (AEA) capacitan en la misma vía o por diferentes.

Hasta la próxima!

Melina y Judith.

Día Ocho

El día 3 de Julio realizamos un recuento de ESP con el tratamiento de CTC.
Hasta la próxima!
Melina y Judith.

Día Siete

El día 26 de Junio contamos ESP del LPC que largaron María Gracia y la Dra. Silvina Perez Martínez los días 20 y 24 de junio.
También largamos nuestro propio LPC.
Hasta la próxima!
Melina y Judith.

Día Seis

El día 19 de Junio volvimos a contar la muestra del dia 12 de junio ya los resultados no eran lógicos.
Hasta la próxima!
Melina y Judith.

Día Cinco

El día 12 de Junio seguimos contando los patrones de ESP del LPC que largamos el jueves 5 de junio.
Hasta la próxima.
Melina y Judith.

Día Cuatro

Hoy 5 de Junio realizamos una capacitación espermática.

Ya lo habíamos hecho el segundo día de la pasantía, pero ese día nosotras contamos los ESP en la cámara de Neubauer y observamos todo el procedimiento que María Gracia realizaba para hacer la capacitación.

Hoy nosotras, junto con María Gracia y Silvina, nos dividimos las tareas y pudimos compenetrarnos más con la práctica. Llevamos a cabo la capacitación de los ESP de Arturo.

Preparamos las columnas de lana de vidrio, les pasamos Sp-TALP, luego descongelamos 3 pajuelas de Arturo y volcamos el contenido en un tubo Falcon, agregamos 1ml de Sp-TALP y pasamos a la suspención de espermatozoides por la columna de vidrio. Luego, llevamos a volumen final de 10 ml con Sp-TALP y centrifugamos.

Nos quedamos con el pellet, lo resuspendimos con Sp-TALP y BSA (sirve para que los ESP no se pegoteen) tomamos 10 microlitros de la solución y contamos al microscopio con la cámara de Neubauer la cantidad de espermatozoides.

Luego tomamos 495 microlitros de esperma y 5 microlitros de la solución correspondiente al tratamiento, en nuestro caso heparina, lo dejamos en la estufa capacitandose durante 45 minutos.

En otro tubo tomamos la misma cantidad de esperma, pero no le ponemos heparina, también lo dejamos en la estufa por 45 minutos. En un tercer tubo pusimos 50 microlitros de esperma, sin heparina, le agregamos 50 microlitros de CTC y 100 microlitros de Glutaraldehido 0.1% (fijador) a este NO lo llevamos a estufa. Después a los tubos que dejamos en la estufa también les pusimos los mísmos microlitros de CTC y Glutaraldehido que en el tubo que no fue a la estufa.

Por último montamos las tres muestras en tres portaobjetos y contamos cuántos intactos, capacitados y reaccionados había por muestra. Aquí también tuvimos el problema de que la fluorescencia se iba y nos costaba más diferenciar los patrones, además de que se cuentan con un objetivo de 20, con lo cual veamos las cabezas de los ESP bastante pequeñas, esto nos dificultó aún más el poder contar.

Obtuvimos un porcentaje de 33.66% en la muetra que estubo a T0 (tiempo cer0), 40% en la muetra s/Hep T45 (sin Heparina, incubada por 45 minutos) y 45.79% en la muetra c/Hep T45 (con Heparina, incubada durante 45 minutos). Nos dió demasiado alto el porcentaje en T0, y en las demás también, es por eso que necesitaremos más práctica y veremos como nos dará la próxima vez que lo hagamos.

¡¡Hasta el próximo Jueves!!

PROYECTO QUIMICA ORT DE GENOMA HUMANO

Investigación en bioquímica molecular y proteómica 2008

Por cuarto año consecutivo, los alumnos del último año de la especialidad química de la Escuela Técnico ORT Argentina realizarán sus proyectos finales en distintas universidades y centros de investigación, con profesionales reconocidos. La metodología de trabajo evita la transposición didáctica, permitiendo a los estudiantes, realizar su actividad final en los lugares donde se está generando el conocimiento.La articulación entre el nivel medio y el posgrado universitario es auspiciada por el CONICET (consejo nacional de investigación científica y técnica). Los proyectos de investigación para el año en curso son:

1) Evaluación de la expresión de la molécula de adhesión cadherina epitelial en tejidos humanos normales y tumorales.
Investigador: Dra. Monica Vazquez-Levin.
Instituto de biología y medicina molecular (IBYME-CONICET).
Alumnos: Yael Dobzewicz y Gala Szapiro.
Blog: http://www.proyecto-6q.blogspot.com/

2) Acción del hexaclorobenceno (HCB) sobre la Uroporfirinógeno descarboxilasa de una línea celular de hepatocitos humanos. Mecanismo de acción.
Investigador: Dra. Maria del Carmen Rios de Molina.
Instituto: Departamento química biológica, facultad de ciencias exactas y naturales.
Alumnos: Lucas Toiw y Uriel Frid.
Blog: http://www.proyectofrid-toiw08.blogspot.com/

3) Modelos experimentales de enfermedades metabólicas: Porfiria y Síndrome Metabólico. Proteómica y Metabolómica de estos disturbios.
Investigador: Dra. Marta Blanca Mazzetti.
Instituto: Departamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA).
Alumnos: Maria Duperron y Mauro Elencwajg.
Blog: http://www.proyectofinal6q.blogspot.com/

4) Factores no hemodinámicos relacionados con la génesis y evolución de la proteinuria durante la enfermedad renal progresiva.
Investigador: Dra. Elsa Zotta.
Instituto: Laboratorio de Fisiopatogenia, Departamento de fisiología, Facultad de medicina, UBA.
Alumnos: Barbara Helueni y Melanie Naiman.
Blog: http://www.proyectoq08.blogpsot.com/

5) Estudio de la participación de la anandamida en la regulación de la interacción espermatozoide-oviducto en un modelo bovino.
Investigador: Dra. Silvina Perez Martinez.
Instituto: Facultad de medicina - UBA.
Alumnos: Judith Arenas Tenenbaum y Melina Braverman.
Blog: http://www.scienceproject08.blogspot.com/

6) El estudio de los mecanismos moleculares involucrados en la regulación del gen UGA4 de Saccharomyces cervisiae en respuesta a cambios en la disponibilidad de nutrientes con el fin de dilucidar las distintas cascadas de señales desencadenadas por dichos nutrientes y establecer sus interconexiones.
Investigador: Dra. Susana Correa García.
Instituto: Departamento de Química Biológica, Facultad de ciencias Exactas y Naturales, UBA. Alumnos: Iván Mikiej y Victoria Salama.
Blog: http://www.proyectoquimica22.blogspot.com/

7) Diagnóstico de la enfermedad de Von Willebrand (VWD) tipo 2N por técnicas fenotípicas y genotípicas.
Investigador: Dra. Adriana I. Woods.
Instituto: Instituto de Investigaciones Hematológicas "Mariano R. Castex" de la Academia Nacional de Medicina.
Alumnos: Abigail Skverer y Daniela Lin.
Blog: http://www.vwd-diagnostico.blogspot.com/

8) Estudio de la mielinogenesis en el sistema nervioso periférico en condiciones fisiológicas y patológicas. Participación de células pluripotentes en el proceso de degeneración-regeneración nerviosa.
Investigador: Dra. Patricia Setton-Avruj.Instituto: Departamento de Química Biológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica (IQUIFIB-UBA-CONICET).
Alumnos: Daniel Averbuj y Eitan Rozenszajn.
Blog: http://www.proyectoaverbuj-rozenszajn.blogspot.com/

9) Diseño y desarrollo de vacunas antitumorales empleando bacterias y células tumorales modificadas con genes inmunomodiladores. Estudio de los mecanismos inmunes inducidos. Investigador: Claudia I. Waldner y Claudia Mongini.
Instituto: Laboratorio de inmunológica celular y molecular. Centro de Estudios Farmacológicos y Botánicos (CEFYBO. CONICET-UBA).
Alumnos: Amalia Surijon y Maria Belen Tolava Rivero.
Blog: http://www.amibeluproyecto.blogspot.com/

10) Marcadores Genéticos Asociados al Cáncer.
Investigador: Dr. Javier Hernán Cotignola.
Instituto: Laboratorio de Cáncer y Apoptosis del Departamento de Química Biológica de la Facultad de Ciencias Exactas y Naturales de la UBA.
Alumnos: Ayelén Marano y Solange Perchik.
Blog: http://www.marcadoresgeneticos.blogspot.com/

11) Expresión del canal de la conductancia transmembranal de la Fibrosis Quistica (CFTR) en placentas Preeclampticas: posible rol en la regulación de la actividad de la Acuoporina-9 (AQP9).
Investigador: Dr. Alicia E Damiano.Instituto: Cátedra de Biología Celular, Departamento de Ciencias Biológicas, Facultad de Farmacia y Bioquímica (UBA).
Alumnos: Gabriel Colodenco y Martín Sapir.
Blog: http://www.proyectofinalcs.blogspot.com/

12) Proteómica de factores secretados por células de cáncer de mama y mama normal con capacidad inhibitoria de la producción lipídica.
Investigador: Dra. Guerra de Grignoli Liliana Noemi.
Instituto: Departamento de Ciencias biológicas. Facultad de ciencias exactas y naturales, UBA-CONICET.
Alumnos: Fabiana Durante y Tamara Broitman.
Blog: http://tyf-proyecto08.blogspot.com/

13) Estudio de la Growth Associated Protein (GAP-43), su interacción con la Ubicutina y su participación en el control del ciclo celular en células NIH3T3 transfectadas en forma estable y transiente. Efecto de la Apo-transferrina en la remielización: participación de la vía Notch en la diferenciación oligodendrioglial.
Investigador: Dra. Ana M. Adamo.
Instituto: Departamento de Química Biológica Patológica, Facultad de Farmacia y Bioquímica de la UBA. CONICET.
Alumnos: Rodrigo C. Pampin y Robby Mattes.
Blog: http://www.proyectodeatuyrobby.blogspot.com/

14) Neovascularización en un modelo murino de inflamación aguda inducida por LPS.
Investigador: Eulalia de la Torre.
Instituto: Facultad de Medicina - UBA - Laboratorio de Inmunofarmacología.
Alumnos: Federico Mauas Walach y Pablo Kuleff.
Blog: http://finalproyectort.blogspot.com/

15) Interacción de sumo-1 y mage-a2 en la regulación del oncosupresor p53.
Investigador: Martín Monte.
Instituto: Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UBA).
: Leonel Stermann y Yair Litman Blog: http://proyectosumo.blogspot.com/

Día Tres

El jueves 29 de Mayo realizamos la técnica de inducción de la reacción acrosomal de los ESP mediante el uso de una molécula que se llama lisofosfatidilcolina (LPC) que se encuentra en los fosfolipidos de membrana. Esta molécula produce fusión de membrana plasmática con la acrosomal externa y permite la vesiculización del acrosoma y liberación del contenido acrosomal (enzimas líticas). Lo que queriamos ver era si los ESP que fueron incubados en condiciones capacitantes eran capaces de sufrir la reaccion acrosomal inducda por LPC. Luego de capacitar a los ESP se separa la poblacion de ESP en dos. Una se incuba 15 min en sp-TALP solo y la otra en presencia de LPC. Luego los ESP fueron lavados y fijados para la evaluación del nº de ESP con acrosoma reaccionado. Esto se midió por la técnica de PSA-FITC (es una lectina que se une específicamente a la manosa unida a una moecula que fluoresce)Contamos en el microscopio la cantidad de ESP reaccionados e intactos en cada tratamiento. Se los veía porque fluorescían, el problema era que al estar expuesto a la longitud de onda seleccionada, con el tiempo la fluorescencia se iba y cada vez costaba más distinguir si estaban reaccionados o no.

Contamos unos 50 ESP por tratamiento (en verdad hay que contar entre 100 y 200, pero como era la primera vez que lo hacíamos contamos menos). Aunque tuvimos ese problema, el total nos dio más o menos igual que cuando María Gracia contó, así que pudimos superar este problema. Hay que restar los reaccionados del tratamiento sín LPC a los reaccionados con el tratamiento con LPC para obtener así los ESP que han reaccionado por acción del LPC y de esta manera se descarta los ESP que reaccionaron sin ser inducidos (reaccion acrosomal espontanea).

Luego ayudamos a Silvina a hacer la segunda parte del Western blot para TRPV1 (un receptor de AEA). Ella ya tenía el "sello" de la corrida de proteínas en el papel de nitrocelulosa, le puso el segundo anticuerpo y luego de los lavados lo incubó con luminol (sustrato de la enzima HRP que esta unida al segundo anticuerpo).

El revelado, se hace con papel de fotografía que se corta al mismo tamaño que el papel de nitrocelulosa, se esperan unos 15 minutos y luego se sumerge el papel fotográfico en revelador hasta que se oscurezca, luego en fijador por unos minutos y después se lava con agua. La placa fotográfica debe ser manejada con guantes para evitar que las huellas dactilares se adhieran a la misma.

En la foto esta cómo nos dio el revelado (no salio muy bueno).

Esta tecnica la describiremos mejor mas adelante.

¡¡Hasta el próximo Jueves!!

Día dos

El jueves 22 de mayo de 2008 llevamos a la práctica todo lo que charlamos el jueves pasado. Largamos un tratamiento de CTC, que consta de lo siguiente:
Primero armamos las columnas de lana de vidrio y vertimos TALP (el medio) por cada una de ellas para ver si la columna estaba muy tapada (servirá luego para limpiar los espermatozoides). Luego descongelamos 7 pajuelas de Arturo y 7 de Lost (los toros), las cuales tienen los espermatozoides (ESP) con sus propios medios (el de Lost tiene yema de huevo y el de Arturo tiene leche), a cada muestra (del mismo toro) la pusimos en tubos Falcon de 15 ml, a estos les agregamos 1ml de Sp-TALP. Luego lo pasamos por las columnas de lana de vidrio, llevamos a un volumen de 10ml con el Sp-TALP y lo centrifugamos.
Descartamos el sobrenadante, y al pellet (el solido que queda abajo comprimido) lo resuspendimos en 200 microlitros de Sp-TALP. De esta suspención se tomo una alícuota para hacer una dilución 1:100 con agua. Se tomaron 10 microlitros de esta suspención y se colocaron en una camara de Neubauer (una placa de vidrio divido en el centro en cinco zonas y a la vez dividido en cuadrados, 16 en las zonas de los extremos, que sirve para contar células y obtener la concentracion/ml). Los ESP fueron contados en el microscopio.
Luego vimos como Maria Gracia separaba el contenido de los tubos en tubitos más pequeños (Eppendorf) en los cuales se llevaría a cabo el experimento de capacitación espermática en presencia de a)heparina (que ya está comprobado que capacita al espermatozoide bovino) b)Meta-anandamida (MAEA, análogo estable de la anandamida): MAEA 10E-10M, c) MAEA 10E-9M, d)MAEA 10E-6M, e) heparina + MAEA 10E-6M.

Día uno

El jueves 15 de mayo de 2008 tuvimos una charla sobre el proyecto con la investigadora Silvina Laura Perez Martinez.
Nos explicó de qué trataba el proyecto y cómo se llevaría a cabo.
Consta de lo siguiente:
La capacitación de los espermatozoides bovinos in vitro, su recuento en cámara de Neubauer y clasificación de los mismos (intactos, capacitados y reaccionados).
La capacitación espermática es el resultado de una serie de cambios estructurales y bioquímicos que sufre el espermatozoide de mamíferos en el tracto de la hembra para obtener capacidad fecundante.
También hablamos sobre la regulación de la anandamida (una molécula de origen lipídico que actúa como mediador en distintas vias de señalización) en la interacción entre el espermatoziode y el oviducto bovino (una pequeña parte de las trompas de falopio de la hembra).
Recorrimos las instalaciones, laboratorios y aparatos.
Silvina nos presentó a otras investigadoras, entre ellas María Gracia, quién está haciendo un doctorado bajo su tutela.

¡Hasta el jueves que viene!
Melina y Judith.

Presentación!!!

Hola, somos Judith Arenas Tenenbaum y Melina Braverman de 6to Química de ORT yatay.
Saludos
Atte.
Judith y Melina.