Día Cuatro

Hoy 5 de Junio realizamos una capacitación espermática.

Ya lo habíamos hecho el segundo día de la pasantía, pero ese día nosotras contamos los ESP en la cámara de Neubauer y observamos todo el procedimiento que María Gracia realizaba para hacer la capacitación.

Hoy nosotras, junto con María Gracia y Silvina, nos dividimos las tareas y pudimos compenetrarnos más con la práctica. Llevamos a cabo la capacitación de los ESP de Arturo.

Preparamos las columnas de lana de vidrio, les pasamos Sp-TALP, luego descongelamos 3 pajuelas de Arturo y volcamos el contenido en un tubo Falcon, agregamos 1ml de Sp-TALP y pasamos a la suspención de espermatozoides por la columna de vidrio. Luego, llevamos a volumen final de 10 ml con Sp-TALP y centrifugamos.

Nos quedamos con el pellet, lo resuspendimos con Sp-TALP y BSA (sirve para que los ESP no se pegoteen) tomamos 10 microlitros de la solución y contamos al microscopio con la cámara de Neubauer la cantidad de espermatozoides.

Luego tomamos 495 microlitros de esperma y 5 microlitros de la solución correspondiente al tratamiento, en nuestro caso heparina, lo dejamos en la estufa capacitandose durante 45 minutos.

En otro tubo tomamos la misma cantidad de esperma, pero no le ponemos heparina, también lo dejamos en la estufa por 45 minutos. En un tercer tubo pusimos 50 microlitros de esperma, sin heparina, le agregamos 50 microlitros de CTC y 100 microlitros de Glutaraldehido 0.1% (fijador) a este NO lo llevamos a estufa. Después a los tubos que dejamos en la estufa también les pusimos los mísmos microlitros de CTC y Glutaraldehido que en el tubo que no fue a la estufa.

Por último montamos las tres muestras en tres portaobjetos y contamos cuántos intactos, capacitados y reaccionados había por muestra. Aquí también tuvimos el problema de que la fluorescencia se iba y nos costaba más diferenciar los patrones, además de que se cuentan con un objetivo de 20, con lo cual veamos las cabezas de los ESP bastante pequeñas, esto nos dificultó aún más el poder contar.

Obtuvimos un porcentaje de 33.66% en la muetra que estubo a T0 (tiempo cer0), 40% en la muetra s/Hep T45 (sin Heparina, incubada por 45 minutos) y 45.79% en la muetra c/Hep T45 (con Heparina, incubada durante 45 minutos). Nos dió demasiado alto el porcentaje en T0, y en las demás también, es por eso que necesitaremos más práctica y veremos como nos dará la próxima vez que lo hagamos.

¡¡Hasta el próximo Jueves!!